產(chǎn)品名稱：血漿cfDNA提取試劑盒（離心柱）

產(chǎn)品貨號(hào)：TD476-50 (50 次反應(yīng))

產(chǎn)品亮點(diǎn)：

可從 10ml 以內(nèi)的血清/血漿，1m 以內(nèi)的羊水或腦脊液中提取到高純度的游離 DNA。

獲得的 DNA產(chǎn)量高、純度好，可以直接用于酶切、PCR、高通量測(cè)序等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

環(huán)境溫度低時(shí) SP消化液或者 SPDNA洗滌液1可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在 37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

蛋白酶K及其保存液可常溫運(yùn)輸。

產(chǎn)品特性：

樣品種類: 血清，血漿，羊水和腦脊液（CSF）?

處理的體積量: 血漿- 單次離心：最多 3ml  兩次離心：最多 10ml

血清- 最多 10ml

羊水- 最多 1ml

腦脊液- 最多 1ml ?

DNA 純度: 獲得的 DNA 產(chǎn)量高、純度好， 可以直接用于 qPCR 高通量測(cè)序等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。?

DNA 回收情況: 回收的 DNA≥100bp(本試劑盒針對(duì)無(wú)細(xì)胞的 DNA 提取經(jīng)過(guò)優(yōu)化)，總量根據(jù)不同的樣品個(gè)體差異可能會(huì)比較大。一般從血清或血漿中提取到的 DNA 濃度在 1-100 ng/ml。?

需要的儀器設(shè)備:水浴鍋或者金屬?。?5℃）。微型離心機(jī)，負(fù)壓多聯(lián)器或立式離心機(jī)

試劑制備：

1.使用前需要添加6.5ml蛋白酶K保存液到蛋白酶K(125mg)里。蛋白酶K的終濃度約為20mg/ml?；靹蛑蠓旁?20℃保存

2.使用前需要添加48 ml 95-100%的無(wú)水乙醇到12ml的SP DNA洗滌液2中。(B)蛋白消化

操作步驟：

從≤5ml的樣品中提取游離 DNA

除非特殊說(shuō)明，一般常溫(15-30℃)進(jìn)行以下操作步驟，以下步驟以 200u血漿，血清或其他生物液體樣品為例，當(dāng)樣品量發(fā)生變化的時(shí)候，只需要等比例的調(diào)整 SP 消化液，蛋白酶K和 SP DNA 結(jié)合液的用量就可以。

1.添加 50u 的 SP 消化液到每 200u 的樣品中，混勻。(根據(jù)表格1按照一定比例添加試劑)2.添加 20u 的蛋白酶 K到每 200m 的樣品中，混勻。(根據(jù)表格1按照一定比例添加試劑)3.在 55℃下孵育 30 分鐘。

4.添加 2 倍體積的 SP DNA 結(jié)合液到步驟 3中消化的樣品中，混勻。

以下步驟可以通過(guò)真空負(fù)壓的方式也可以通過(guò)離心的方式進(jìn)行操作(負(fù)壓設(shè)備所用真空多連器推薦美國(guó) ZYMORESEARCH 公司)

負(fù)壓操作步驟:

5.確認(rèn)3號(hào)柱S套裝(連接15ml套筒)連接緊密后放置在負(fù)壓多連器上。

6.倒入上述步驟4的混合液(含 SP DNA 結(jié)合液)，打開(kāi)真空開(kāi)關(guān)使液體通過(guò)柱子。確保液體通過(guò)柱子并且沒(méi)有殘留液體下流后，關(guān)閉真空泵并拔掉連接的 15ml套筒。

以下步驟 7-8 也可以用臺(tái)式離心機(jī)操作。

7.關(guān)掉真空開(kāi)關(guān)，倒入 400uSP DNA洗滌液1到柱子上，打開(kāi)真空開(kāi)關(guān)，讓液體通過(guò)3號(hào)柱S

8.關(guān)掉真空開(kāi)關(guān)，加入 700μSP DNA 洗滌液 2(請(qǐng)先檢査是否已加入無(wú)水乙醇!)到3號(hào)柱S內(nèi)，打開(kāi)真空開(kāi)關(guān)讓液體通過(guò)柱子。

9.重復(fù)第 8步。

10.將3號(hào)柱S套在 2ml收集管上，然后放置在臺(tái)式離心機(jī)上全速離心2分鐘以去除殘留乙醇。

11.將3號(hào)柱S套在一個(gè)干凈的 1.5m離心管內(nèi)，添加 50u的 DNA洗脫液到柱基質(zhì)上。(洗脫液事先在 65-70℃水浴中預(yù)熱，洗脫效果更好)，室溫放置3分鐘，在>10,000xg條件下離心1分鐘來(lái)洗脫 DNA。歡迎訂購(gòu)：

天津益元利康生物科技有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)簡(jiǎn)石生物血漿cfDNA提取試劑盒（離心柱）（TD476），歡迎選購(gòu)！